Kromasil雷竞技网页版官网登录衝洗與維護

一、柱體(ti) 積的計算

我們(men) 在一些衝(chong) 洗方法的資料中，經常會(hui) 看到10倍柱體(ti) 積或者20倍柱體(ti) 積的說法。那麽(me) 柱體(ti) 積應該如何計算呢？我們(men) 可以把色譜柱想象為(wei) 一個(ge) 圓柱形，因此可以參考圓柱形計算公式。

V=πr²L

V=色譜柱體(ti) 積(mL)  r=色譜柱半徑(cm)  L= 色譜柱長度(cm)

常規250*4.6mm的規格，柱體(ti) 積經計算為(wei) 4.15mL，以1mL/min的流速10倍柱體(ti) 積就是42min左右。以下是一些常見規格的柱體(ti) 積值，可作為(wei) 參考。

二、Kromasil反相C18柱的衝(chong) 洗

反相C18柱是我們(men) 日常實驗中應用廣泛的固定相之一，首先我們(men) 先從(cong) 反相C18柱的常見情況衝(chong) 洗進行介紹，分別是：一般汙染的衝(chong) 洗、使用緩衝(chong) 鹽後的衝(chong) 洗、生物樣品分析後的衝(chong) 洗。

1、一般汙染的衝(chong) 洗

一般汙染是指的是我們(men) 每次分析使用後常見的汙染情況，例如試劑和樣品雜質對色譜柱產(chan) 生的汙染，或者是一些聚合物的形成等。

①   高比例的水相（例如：10%甲醇/乙腈-水溶液）衝(chong) 洗10倍柱體(ti) 積。這樣可以將殘留在色譜柱中的緩衝(chong) 鹽和一些極性化合物衝(chong) 洗幹淨；

②   高比例的有機相（例如：80%甲醇/乙腈-水溶液）衝(chong) 洗10-20倍柱體(ti) 積。高比例有機相可以將一些疏水性的雜質衝(chong) 洗幹淨；

③   如果執行上述衝(chong) 洗之後還是汙染問題沒有被解決(jue) ，可以選擇異丙醇衝(chong) 洗10-20倍柱體(ti) 積。

2、使用緩衝(chong) 鹽後的衝(chong) 洗

流動相中時常會(hui) 加入一些緩衝(chong) 鹽，這些緩衝(chong) 鹽可能會(hui) 在色譜柱中析出，導致柱壓升高等問題，影響後續使用。

①   開啟柱溫箱，高比例的水相（例如：10%甲醇/乙腈-水溶液）衝(chong) 洗20倍柱體(ti) 積；

②   以未加入緩衝(chong) 鹽的方法起始比例流動相進行平衡。

3、生物樣品汙染

生物分析實驗中，通常前處理較為(wei) 複雜，導致樣品無法處理幹淨。可能會(hui) 殘留小分子肽等物質，其會(hui) 吸附在色譜柱的管壁或者篩板上，造成柱壓高、峰型差、分離度降低等問題。

①   在流動相的有機相中加入0.1%的三氯乙酸，以增強對吸附蛋白質的洗脫；

②   如果問題仍未解決(jue) ，可嚐試在色譜柱裏麵進100uL三氮乙醇，嚐試清洗強保留的蛋白

三、Kromasil色譜柱衝(chong) 洗指南

關(guan) 於(yu) 其他常見色譜柱的衝(chong) 洗方法，可按照以下提示進行嚐試，若使用其他品牌的色譜柱請和廠商工程師確認後進行參考。

1、反相柱的衝(chong) 洗

使用10倍柱體(ti) 積的如下溶劑依次清洗

①   90%水-乙睛溶液

②   100%四氫呋喃

③   95%乙腈-水溶液

④   不含鹽的初始比例流動相

⑤   初始比例流動相平衡

2、正相柱的衝(chong) 洗-矽膠柱

使用10倍柱體(ti) 積的如下溶劑依次清洗

①   異丙醇

②   甲醇

③   乙酸乙酯

④   流動相

3、正相柱的衝(chong) 洗-氰基柱、二元醇基柱

使用10倍柱體(ti) 積的如下溶劑依次清洗

①   三氯甲烷

②   異丙醇

③   二氯甲烷

④   流動相

色譜柱汙染在日常分析中在所難免，因此可以考慮購買(mai) Kromasil保護柱來進行預防。Kromasil保護柱采用分析柱相同填料填充，不增加死體(ti) 積與(yu) 不改變分離的同時，可以有效保護分析柱，延長使用壽命。